Подготовка на пробата:
Събиране на проби: Събирайте проби като кръв, тъкан, слюнка и урина според целта на експеримента.
ДНК Екстракция: Използвайте специален комплект за екстракция на ДНК, за да извлечете ДНК от пробата.
PCR реакция препарат:
Проектирани праймери: Проектирайте специфични за грундира двойки, базирани на целевата последователност за амплификация на шаблонната ДНК.
Пригответе реакционна смес: включително шаблонна ДНК, праймери, буфер, ДНК полимераза, DNTP (дезоксинуклеозид трифосфати), Mg 2+ и т.н.
Задайте PCR програма:
Настройки на инструмента PCR: Въведете предварително зададените параметри на цикъла на PCR, като температура на предварително загряване на 95 градуса, температура на денатурация (като 95 градуса), температура на отгряване (като 55 градуса), температура на удължаване (като 72 градуса) и брой цикли.
PCR реакция:
Добавете проба: Добавете реакционната смес към PCR реакционния резервоар или чип и всяка проба обикновено има една реакция добре.
Извършете PCR: PCR инструменталните цикли според предварително зададената програма, включително стъпки за отопление, охлаждане, отгряване и удължаване.
Анализ на продукта:
Охлаждане след усилване: След приключване на PCR, пробата се охлажда за кратко на 4 градуса.
Електрофоретично разделяне: Използвайте гел електрофореза технология, като агарозен гел електрофореза, за да отделите PCR продукти с различна дължина.
Флуоресцентно сканиране: Флуоресцентно белязаните праймери излъчват светлина със специфична дължина на вълната в амплифицирания продукт, а PCR инструментът чете тези сигнали и ги записва.
Обработка и интерпретация на данни:
Софтуер за анализ на данни: Използвайте специализиран софтуер, за да анализирате флуоресцентния сигнал и да изчислите концентрацията или относителната концентрация на целевия фрагмент.
Тълкуване на резултатите: Въз основа на PCR кривата и изходната линия определете дали PCR е успешен, дали целевият фрагмент съществува и колко е.
Резултати от резултатите и запазване:
Запишете резултатите в експерименталния доклад и правилно запазете оригиналните данни и проби.